神马文学网生物检验中两重要试剂应用点评
来源：百度文库 编辑：神马文学网 时间：2024/04/29 11:41:04
生物检验中两重要试剂应用点评
[日期：2007-02-27] 来源：sy 作者：生物实验室 [字体：大 中 小] [dvnews_page]用“新制的Cu(OH)2 (斐林试剂)”鉴定可溶性还原糖与用“双缩脲试剂”鉴定蛋白质的实验是中学生物检验中的重点内容，为便于学生理解和掌握，现归纳总结如下。
1．原理
（1）可溶性还原糖鉴定原理
利用化学中醛基（-CHO）、半缩醛羟基的还原性，在加热的条件下，可将氢氧化铜还原为砖红色的氧化亚铜沉淀，而还原性糖本身则被氧化为相应的有机酸。以葡萄糖为例，其反应式如下：
CH20H-(CHOH)4-CHO+2Cu(OH)2
而可溶性还原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖等的分子中含有的具有还原性的半缩醛羟基，当与新配制的一定浓度的 Cu(OH)2悬浊液混合后，就发生如上反应 。
（2）蛋白质的鉴定原理
在碱性溶液中，双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与Cu2+ 作用，形成紫色或紫红色的络合物。故双缩脲试剂可鉴定双缩脲的存在，而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键。因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。
2．试剂的配制
（1）斐林试剂的配制
甲液：质量浓度为
乙液：质量浓度为
使用时临时配制，将4～5滴乙液滴入 2mL甲液中，振荡混合均匀后即可使用。关键是注意NaOH要过量。
（2）双缩脲试剂的配制
取10gNaOH放入烧杯内加水 100mL，待充分溶解后倒入试剂瓶中配制成质量浓度为
取
3．实验现象
（1）斐林试剂鉴定还原糖的实验
因先加入刚配制的Cu(OH)2溶液变成浅蓝色；加热后，部分Cu(OH)2被还原为砖红色Cu20，因二者混合故呈现棕色；随着反应的继续进行，Cu(OH)2被全部还原为Cu20，故出现砖红色的沉淀。颜色变化为：“浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)” 。
（2）双缩脲鉴定蛋白质的实验
加入双缩脲试剂A，溶液为无色：加入双缩脲试剂B，因有Cu(OH)2生成，故呈现浅蓝色；振荡均匀后，由于反应的进行，出现紫色的混合物。
颜色变化为：“无色→浅蓝色→紫色”。
4．试剂使用中注意的几个问题
新制Cu(OH)2
(1)新制Cu(OH)2试剂为何要现配现用?
因斐林试剂很不稳定，容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制。
(2)斐林试剂鉴定时，为何不能先加入NaOH，后加入CuSO4而必须混合后再加入?
因为若先加入NaOH，还原性糖中的还原性半编醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuS04后不能产生Cu2O沉淀；只有将其新配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。
(3)在做实验时，为何一般不选用双子叶植物的叶片和单子叶植物(如韭菜，鸢尾)的叶片?
由于在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉，暂时储存在子叶内，因此最好不用双子叶植物的叶片作实验材料，在单子叶植物如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶内含有大量的可溶性还原糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此也不选用单子叶植物的叶子。
双缩脲试剂
(1)在使用双缩脲时，为什么要先加入试剂A，后加入试剂B?
先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与Cu2+发生颜色反应。
(2)若加入试剂A后，为什么只能加入 3-4双缩脲试剂B，而不能加过量?
因为若加入过量的双缩脲试剂B， CuSO4在碱性溶液中生成大量的蓝色 Cu(OH)2，沉淀，会遮蔽实验中所产生的紫色，影响观察结果。