大菱鲆 “红嘴病”病原分离及药物防治技术研究

         大菱鲆 “红嘴病”病原分离及药物防治技术研究                       肖国华 高晓田 赵春龙 崔兆进 杨金晓              (河北省水产研究所．河北省海洋生物资源与环境重点实验宅．河北秦皇岛066000)      2008年5月在河北、辽宁部分大菱鲆养殖场               以上相同的条件进行培养，实验过程中，每 日观察  相继发生了养殖大菱鲆 “红嘴病”，并造成较大伤           记录实验鱼的体色、活动力、摄食、发病症状和死  亡。该病主要危害 5O～150g鱼种，主要症状表               亡情况。  现为：病鱼吻端及腹面上颌出血，部分鱼鳃盖有出                                                         2 结果 血的溃烂小凹洞，口腔内出血，部分病鱼眼睛肿大  突出、挑破外膜内有大量脓液，肠道充 ll【L无食物，         2．1病原体的分离、纯化  肠道末端有少量粘稠液体，肝脏充血、色暗淡呈糜                      从不同组织、器官分离培养的优势菌株，经过  散状，脾脏肿大发红。对该病的病原进行了分离               分离、纯 化，得 到 优 势 菌 2株，编 号 为  并进行了药物防治实验。                                    20080602DWl和菌株代号：20080602DY1。这                                                            两株菌菌落形态相似，经 48h培养，均在平板上 1 实验材料和方法                                                           微小菌落，菌落无色透明，表面光滑湿润，菌落边  1．1 实验材料                                             缘整齐。      病鱼材料来自辽宁兴城市大菱鲆养殖场50                   2．2 药敏结果  ～ 150g症状明显的活鱼；病原感染及药物实验                     菌株 20080602DW1对抗生素头孢曲松、诺  鱼来自秦皇岛山海关大菱鲆养殖场健康无病害的                 氟沙星、头孢 噻肟、氟苯尼考 敏感；菌株：  50g左右的鱼种。                                             20080602DY1对氨苄西林、头孢噻肟、头孢呋辛  1．2 实验方法                                               那、氟苯尼考敏感，具体情况见表l和表2。 1．2．1 病原体的分离、纯化 分别刮取病鱼体表                      表 1 菌株20080602DWl药敏实验结果  病灶、肠道脓液、眼内脓肿、肝脏组织接种于  2216E培养基上，经 48h培养，将具有生长优势  的菌群进行分离，再对分离的菌株经过几次纯化，  得到纯化菌株。  1．2．2 药敏实验 采用药敏纸片法，将药敏纸片  置于涂满菌液的培养皿中，48h后观察、测量药  敏纸片周围抑菌圈大小，根据药敏纸片抑菌圈大  小确定敏感药物。  1．2．3．回接感染实验 将分离出的几株优势菌  进行平板培养，接种环挑取单菌落于无菌生理盐  水中，制成菌悬液。每组实验用鱼 6尾，按 0．1  mL／尾的量进行注射，其中腹腔注射4尾、肌肉注  射2尾，空白对照一组，按0．1mL／尾的量注射无  菌生理盐水。实验鱼体长 llcm左右，体重约 1O  g。实验条件为lOL水体中放人6条鱼，充气，每   日两次投饵，实验组设计见图3—7。每日换水量  大约50 左右，水温 15～17℃。对照组采用与   一  38 一
----------------------- Page 2-----------------------         表2 菌株20080602DY1药敏实验结果                                                                       3 讨论                                                                               2008年5月底受黄海研究所雷荠霖院士委                                                                         托，对葫芦岛兴城市发病的养殖大菱鲆，进行了现                                                                         场诊断，并取样回河北省水产研究所进行病原分                                                                         离及药敏实验。爆发疾病的养殖场面积3000                                                                         In。                                                                            ，养殖大菱鲆 16万尾，主要为 100～150g鱼                                                                           种，苗种来 自山东秋苗；水源为地下水，水温 1l～                                                                          15℃；养殖密度7O尾左右／m ；换水每天一次(主                                                                           要是水源供应不足)。发病主要症状：鱼吻端充                                                                           血，眼球突出，摄食差，死亡高峰每池每天达到5O                                                                          ～ 6O尾。使用过甲醛、抑菌净、红霉素等药物，也                                                                         没有效果，发病后换水增加为2次／d，水温降至                                                                         l1．7～12℃，主要感染鱼为体重 IO0t150g。从                                                                         我们的调查情况看，该病的发生与养殖密度偏大、                                                                         换水量少有密切的关系。养殖场内的工具也没有                                                                         做到专池专用，导致了养殖池间的互相传染。在                                                                         我们的建议下经过减少养殖密度、增大了换水量                                                                         以及投喂头孢类药物的药饵，发病鱼的病情得到 2．3 回接感染实验结果                                                  了及时控制 。对于该病的预防及治疗，保持合理      经过近2周的感染，注射菌株2o08O602Dw1                               的养殖密度、充足的换水是非常必要的。实际上  和20080602DY1的大菱鲆全部死亡，而对照组全                              很多细菌性疾病的发生都是由于养殖密度过大、  部存活，具体情况见表3。两组注射菌液的鱼中                              换水量跟不上，从而导致池内水质恶化、病菌滋  有部分鱼出现了”红嘴病”如嘴及鳃盖部位出现充                           生。很多病菌是 自然水体的正常菌群，在鱼体健  血红点。解剖死亡的鱼可见腹腔内有少量积液，                             康，水质良好的情况下是不会引起发病的，只有当  肠道内无食物，肠壁血管充血变粗，肝脏及肾脏充                           养殖环境恶化的情况下，养殖种类体质下降的情  血肿大。                                                               况下才导致疾病的发生。另外养殖厂内工具的专              表3 回接感染结果                                           池专用也是很重要的，防止在发生疾病的情况下，                                                                         养殖池之间的相互传染。从药敏结果以及实际治                                                                        疗效果看，在发生“红嘴病”的情况下，可用头孢类                                                                        药物拌饵料制成药饵投喂，效果较好。                                                                        20080602DWl和20080602DYl的菌落形态                                                                        高度相似，回接感染实验菌均导致健康鱼全部死                                                                        亡，以及药敏实验中2种细菌均对头孢类药物敏                                                                        感，初步判断这2种菌有可能是同一种菌，它们具                                                                        体的种属地位有待进一步的生理生化实验以及                                                                        l6SrRNA基因鉴定。                                                                (收稿 日期 ：2008—12—22)