CENTAUR化学发光检测系统甲状腺功能检查性能证实试验

2007-08-11 | 甲状腺及其相关激素的临床应用
甲状腺为球形结构的滤胞所组成，滤泡的上皮细胞合成和分泌甲状腺，以甲状腺球蛋白的形式储存在含胶质的滤泡内。另一种叫C细胞的少数滤泡旁细胞分泌降钙素。甲状腺主要分泌两种碘化氨酸：3，3’，5，5’——四碘甲状腺原氨酸（T4）；和3，5，3’，——三碘甲状腺原氨酸（T3）。
T4均为甲状腺合成，T3的部分由T4在外周组织脱碘转化而来，少数由甲状腺分泌。甲状腺也合成微量的3，3’，5’——三碘甲状腺原氨酸（反T3或RT3），大部分由T4脱碘而来。
用全自动化学发光免疫分析仪检测的甲状腺由关激素由总T3，总T4，FT3，FT4及TSH等，对甲状腺的诊断和研究产生重要的影响。
一．甲状腺的生化生理作用和代谢
1．甲状腺激素的产生
T4是Tg中含量最高的碘化氨基酸，比T3多10-20倍，T4也是血清中最多的碘化氨基酸，占血清蛋白结合碘的90%以上，T3的产量和外池的容量明显小于T4。
游离T4和T3分别占T4，T3的0.02%和0.2%，T4的血清浓度比T3高50——80倍。而游离T3的活性比T4大3-5倍，RT3无活性。
2．甲状腺激素的输送和代谢
T3，T4被酶分解后进入血液，99.98%的T4和99.8%的T3在血中与结合蛋白结合进行运输。
T3和T4的代谢由两种途径：
（1）是通过与葡萄苷酸和硫酸结合物的形式由胆汁及尿排泄，占日消耗总量的15%-20%。
（2）是经脱碘酶降解为其他碘氨酸，如T2是T3，rT3的主要代谢产物。
3．甲状腺激素的调控
甲状腺激素的分泌受下丘脑，腺垂体和血浆中甲状腺激素水平的调节，以维持血浆激素水平的动态平衡，这就是下丘脑-垂体-甲状腺轴系统。
TSH是垂体前叶分泌的一种糖蛋白，它受下丘脑的促甲状腺激素释放激素（TRH）刺激而释放，血清T4，T3水平的增高则可抑制TSH的分泌，称为负反馈。
甲状腺尚有一种自主调节功能。碘化物的摄入量对甲状腺的功能起直接调节作用，故甲状腺对缺碘状态有一定程度的自身调节代偿作用。
4．甲状腺激素的生理作用：
（1）氧化，生热及温控作用
甲状腺激素增加细胞的氧化速率，产生热量
（2）物质代谢的作用
促进糖，脂肪和蛋白质的代谢。
（3）促进生长发育
甲状腺激素促进：a.细胞增多，体积增大，于是机体生长。b.软骨骨化和牙齿发育；c.大脑成熟
二．甲状腺激素检测的临床意义：
1．TSH的临床意义
（1）鉴别甲低症
由下丘脑功能受损后出现的甲低症状。这可能由于TRH↓→使TSH↓→造成T3、T4↓之故，这称为继发性下丘脑性甲低。而原发性甲低患者T3、T4过低而分泌是强反应的。继发性甲低病变部位下丘脑、垂体。原发性甲低病变部位甲状腺。
（2） 甲亢症
甲亢患者的T3、T4过高，反溃抑制TSH的分泌使血清TSH水平降至接近于零，现在应用超敏TSH（S－TSH或h-TSH）来诊断甲亢（而常规TSHRIA为过时的试验）。
（3） 甲肿
a.甲状腺肥大患者，由于缺碘使T3、T4分泌减少，因此TSH分泌增加，当肿大后或补碘后TSH水平可恢复正常。甲低、粘液性水肿、呆小症；b.TBG结合力下降；
（4）TSH反应性低下可见
a.甲亢；b.无甲亢的自主功能性甲状腺疾病；c.垂体或下丘脑损害造成的甲低症；d.PRL瘤；e.库兴氏综合症；f.肢端肥大症等。
2． T3、T4的临床意义
（1） T3在以下疾病情况下都有增高：
a.甲亢； b.T3型甲亢； c.T3毒血症； d.使用甲状腺制剂治疗过量；e.TBG结合力增高症；f.亚甲炎等；
T3在以下疾病情况下都有降低：a.非甲状腺病的低T3综合征；d.慢性甲状腺炎等。
（2）T4在以下疾病情况下（甲亢、T3毒血症）都有与T3相平行的变化。
3． FT3和FT4的临床意义
T4、T3被水解后进入血液，99.98%的T4和99.8%的T3以非共价键与血浆蛋白结合，其余为FT4 0.02%和FT3 0.2%。而FT3、FT4是实际进入靶细胞与受体结合而发挥作用的激素物质。故甲状腺的机制状态与循环中FT3、FT4的水平密切相关。可以做为区别甲亢、甲低及甲功的亚临床状态。其正常植不受TBG各种情况增加和减少的影响，是反应甲状腺功能的灵敏指标，1989年Hamburger推荐以高灵敏度的TSH、FT3和FT4为甲状腺功能测定的首选方法已被临床界广泛采纳。
临床上确诊为甲亢或甲低步骤，有以下两个方案供参考。
方案一：
方案二：
诊断甲亢以往认为以TT3符合率最高，TT4次之，TSH最低，目前国内外学者一致的认识是S-TSH（超敏TSH检测）、FT3、FT4的联合检测明显优于TT3、TT4，前者不受血清TBG含量的影响，可使一些TT3、TT4正常的早期甲亢得到确诊，S-TSH又可使甲亢的诊断提高到亚临床水平。
诊断甲亢灵敏度的顺序为S－TSH>FT3>TT3>FT4>TT4
甲低的诊断灵敏度顺序为S－TSH>FT4>T4>T3>T3
TSH正常参考范围：0.34-5.06uIU/ML（根据仪器和试剂不同，值亦不同）
TT3、TT4正常参考范围：1.34-2.73nmol/l    78.4-157.4nmol/l
FT3、FT4正常参考范围：3.67-10.43pmol/l    11.2-20.1pmol/l

【摘要】目的：评价全自动化学发光免疫分析仪测定甲状腺素进行仪器性能。方法：用CENTAUR全自动化学发光免疫分析仪测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，分别计算批内精密度、批间精密度、准确度和可报告范围以及TSH的分析灵敏度。结果：T3、T4、FT3、FT4、TSH的批内精密度分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%，批间精密度分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%；T3可报告范围为0.15～12.3 nmol/L，T4的可报告范围为3.9～387.0 nmol/L，FT3的可报告范围为0.3～30.8 pmol/L，FT4的可报告范围为1.3～155.0 pmol/L，TSH的可报告范围0.01～150.0 mIU/L；TSH分析灵敏度：检测低限为0.006 mIU/L，生物检测限为0.024 mIU/L，功能灵敏度为0.024 mIU/L。结论：CENTAUR化学发光检测系统测定甲状腺功能具有灵敏度高，可报告范围宽，重复性好等优点，适合于临床应用。
【关键词】自动检测；化学发光免疫分析法；甲状腺激素
文章编号：1009-5519（2007）11-1618-03 中图分类号：R446 文献标识码：A
化学发光免疫分析是80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术，可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目[1]。CENTAUR是拜耳公司推出的最新全自动化学发光免疫分析仪，测定速度快，测定项目齐，近2年在国内逐渐推广，本文对其性能进行综合评价。
1 材料与方法
1.1 仪器：CENTAUR全自动化学发光免疫分析仪(BAYER公司)。
1.2 试剂：发光试剂是BAYER公司配套试剂、质控品、标准品。
1.3 对象：本院门诊和住院患者，其中甲状腺功能亢进（简称甲亢）10例，甲状腺功能减低（简称甲减）10例，甲状腺功能正常10例，平均年龄40岁。每例取3 ml血，离心3000 r/min，10分钟，取血清-70 ℃保存备用。甲亢和甲减诊断符合相应诊断标准[2]。
1.4 检测方法：利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法，其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似[3]，严格按试剂盒操作说明书操作。
1.4.1 批内精密度：血清样本10份，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，一批每份重复测定10次，计算其变异系数（CV）。
1.4.2 批间精密度：血清样本10份，每天各测定1次，共测定10天，计算其CV。
1.4.3 不准确度：由BAYER公司提供原装3个浓度的标准品，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，每个浓度重复测定3次，计算不准确度。
1.4.4 可报告范围：收集甲亢患者血清标本，T3、T4、FT3、FT4浓度靠近厂家提供可报告范围上限作为高值浓度水平（H），厂家提供稀释液作为低值浓度水平（L），H和L按5H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+5L的关系各自配制，形成系列检测标本。根据试验结果，采取平均斜率确定高值浓度水平应含有待测物的值，然后依照试验样品配制稀释关系，推算出不同样品中应具有的待测物的值。这些值成为可报告范围的预期值（X），所有检测标本各测2次，其均值为实测值（Y）。以X表示各样品的预期值及实测值，将所有结果作图。若所有点在坐标纸上呈明显直线趋势，则对数据进行回归统计，得到Y=bX+a。理想状态下，预期值与实测值间呈通过原点、斜率为1的回归线，即斜率b为1，截距a为0。实际统计结果b不会正好等于1，a不会为0。若b很接近1，a近于0，则可直接判断该测定方法可报告范围在实际已涉及范围。
1.4.5 TSH分析灵敏度：用Bayer公司提供的TSH专用稀释液作为空白样品，用空白样品对0.04 mIU/L血清按一定梯度进行稀释（见表1），空白样品做10次批内重复测定；对其它系列稀释样品做天间重复测定，做10天。
2 结果
2.1 批内精密度实验：血清样本10份，分别测定T3、T4、FT3、FT4、
TSH含量，重复测定10次，计算其变异系数（CV），见表1。

2.2 批间精密度：血清样本10份，每天各测定1次，共测定10天，计算其CV，见表2。

2.3 不确定度试验：由BARER公司提供原装3个浓度的标准品，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，每个浓度重复测定3次，计算均值，结果见表3。

2.4 可报告范围
2.4.1 T3所测结果得到回归方程：y=1.069x-0.2468,r2=0.9966，截距经t检验，ta=1.36，
2.4.2 T4所测结果得到回归方程：y=0.99x+0.79542,r2=0.995,＞0.95，截距经t检验，ta=0.36,＜t0.05(4)=2.776，截距与0无统计学差异。由此可确定厂家提供的线性范围有效，即T4的可报告范围为3.9～387.0 nmol/L，见表5。