农杆菌LBA4404感受态细胞如何制备-核酸基因问题-生物秀知道

来源：百度文库编辑：神马文学网时间：2024/04/29 19:08:52

（1）将-80℃保存的农杆菌LBA4404菌液解冻，划线接菌于YEB固体培养基。
（2）挑取农杆菌LBA4404单克隆，接种于5ml YEB液体培养基中，28℃、200r/mim培养过夜；
（3）取2ml培养基于50mlYEB液体培养基中继续培养，直至OD₆₀₀为0.5左右；
（4） 4℃、5000r/min、离心5min，弃去上清液；
（5）用10ml冷的20mmol/L CaCl₂悬浮菌液，冰浴30min；
（6） 4℃、5000r/min，离心5min，弃去上清液；
（7）用1ml冷的CaCl₂ （20mmol/L）悬浮，分装成100μl／管，每管中加入100ul预冷的40%甘油，液氮中速冻后至-80℃保存。

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