《微生物检验》精品课程1

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第二章 肠杆菌科

肠杆菌科:存在于人、动物肠道,生物学性状相似的一群革兰阴性杆菌无芽胞杆菌。

第一节 概述

一.形态、染色
  革兰阴性杆菌、无芽胞,有菌毛,周鞭毛(除志贺、克雷伯、鼠疫),少数有F、R、Col
二.营养要求、培养:多元立体法
气体:需氧气或兼性厌氧,兼具呼吸型或发酵型
营养:要求不高
生长现象:
液体:混浊
血平板:光滑、湿润、灰白色、中等大小菌落
三.生化反应:
生化反应活跃,致病性强的生化反应能力弱。
定科试验:触酶(+),氧化酶(—)硝(+)
四.抗原构造:
O抗原:耐热,颗粒状凝集
H抗原:不耐热,60℃30’破坏
表面抗原:K抗原、Vi抗原
五.遗传变异现象:
1.S—R变异
2.H—O变异
3.其他变异
六.传染途径:
1.致病性肠道杆菌:经口多数,食物中毒、肠热症等。
2.条件致病菌:
为医院感染的主要病原菌群
重要肠道杆菌种类及所致疾病:P183
七.致病物质:
表面抗原
内毒素
肠毒素
八.检验方法:启发引导法
1.标本采集
肠道外:血、尿、体液、呼吸道
肠道内:粪、肛拭
2.分离培养:
肠外标本:增菌(血)→血平板/加Mac
肠内标本:标本→SS、Mac
3.鉴定:
鉴定原则:
生化反应(KIA,IMVIC、MIU)、抗原构造

第二节 埃希菌属

一.微生物检验:
(一)检验程序:
1、项目准备:
(1)标本采集:有血液、尿液、痰液等。
(2)登记
(3)标本处理
2、项目实施:
(1)细菌接种
(2)生化反应
(3)血清学鉴定
(4)药物敏感试验
3、项目结果:
鉴定结果报告
药物敏感试验结果报告
(二)检验方法:案例分析法
1、项目准备:
2、项目实施:
(1)直接镜检(除血液标本外):
标本直接涂片,革兰染色,显微镜检查
(2)分离培养:
1)血标本:
必须增菌。采用无菌手续抽5ml血液加到50ml增菌液中,经37℃后观察结果。若出现混匀现象等,则转血平板,经37℃后观察结果。根据菌落特征转生化反应鉴定细菌,经37℃后观察结果。做药物敏感试验,作出最终报告。
若不出现混匀现象等,则继续培养7天,期间每天观察,若7天不长,报阴性。
2)尿液:
离心,取沉淀涂片、染色、镜检。尿液沉淀接种血平板及Mac。经37℃后观察结果。根据菌落特征转生化反应鉴定细菌,经37℃后观察结果。
尿→细菌计数(≥105/ul才有诊断价值)
做药物敏感,作出最终报告。
3)粪、脓:
标本接种血平板、弱选择平板经37℃后观察结果。根据菌落特征转生化反应鉴定细菌,经37℃后观察结果,做玻片凝集、药物敏感试验,作出最终报告。
(3)鉴定试验:实践开放法
1)初步鉴定:表18-3
2)最后鉴定:生化反应、试剂盒
3)血清学试验:
①EPEC:分离培养,生化反应、抗原分型(O、K)
②ETEC:分离培养,生化反应,毒素测定
③EIEC:分离培养,生化反应,血清学分型,毒力试验
④EHEC:分离培养,生化反应,血清学分型,有50多个血清型,具有代表性的是O157:H7。
可用山梨醇麦康凯琼脂(SMAC)直接筛选不发酵山梨醇的无色菌落,生化反应符合标准大肠埃希菌生化反应,取次代培养的O157:H7,可用乳胶凝集试验测O157:H7抗原。
3、项目结果:
最终报告:“检出大肠埃希菌”
药物敏感试验结果报告
二、生物学特性:相关知识
(一)形态与染色:
革兰阴性杆菌杆菌、周鞭毛、有菌毛,微荚膜
(二)培养特性:多元立体法
普通平板/血平板:圆、凸、表面光滑、边齐、灰白色菌落,有的菌株有β-溶血环
选择平板:分解乳糖、有色菌落
液体:混浊
(三)生化反应:
葡萄糖(⊕)、乳糖(⊕/—或迟)、蔗糖(⊕/—)IMVIC(++--)
(四).抗原构造:
1.O、K(L、A、B)、H
2.血清型表示式:O:K:H
(五).抵抗力:
胆盐、煌绿受抑,对氯、链、庆大敏感,但易耐药。
三.致病性和免疫性:相关知识
(一).致病物质:
1.侵袭力
(1).K抗原
(2).菌毛
2.毒素:
内毒素
肠毒素:不耐热(LT)、耐热(ST)
(二).所致疾病:多元立体法
1.机会感染:泌尿系统感染等
2.肠内感染
(1)肠产毒型大肠埃希菌(ETEC)
(2)肠致病型大肠埃希菌(EPEC)
(3)肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)
(4)肠出血型大肠埃希菌(EHEC)
(5)肠集聚型大肠埃希菌(EAggEC)